Elisa检测之组织样本的处理方法

Elisa是一种快速、灵敏、准确可靠的定性定量分析方法。样本的处理对于Elisa 实验的成功起着关键的作用。

组织样本一般制成组织匀浆，处理方法如下：

(1) 使用干净的工具解剖目标组织，尽快置于冰上，以防被蛋白酶降解。（暂时不处理的组织，置于圆底微量离心管中，浸入液氮中“速冻"，在 -80℃ 下存储样品备用）。

(2) 用预冷的 PBS 缓冲液（0.01M，pH=7.4）洗涤组织去除残留的血液，称重后备用。若组织块较大，需先剪碎。
(3)在冰上用研磨缓冲液（常用 PBS 缓冲液，但最好使用 50mM Tris+0.9%NaCL+0.1% SDS,PH 7.3。或者中等强度 RIPA 细胞裂解液，注意 RIPA 裂解液 PH 值需为 PH7.3，建议不要使用含 NP-40，Triton X-100 和高浓度 DTT 的组分，会抑制抗原抗体反应。）研磨组织匀浆（加入研磨缓冲液的体积取决于组织的重量。一般情况下，每 1 克组织碎片应使用 9ml 研磨缓冲液。另外建议在研磨缓冲液中加入一些蛋白酶抑制剂，如1mM PMSF）。得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理（超声破碎过程中，需冰浴降温；反复冻融法可重复 2次）。
(4)将制备好的匀浆液于 5000×g 离心 5 分钟，留取上清即可检测。或分装冻存于-20℃或-80℃。
(5)根据实验需要，组织匀浆样本可先定量总蛋白,以便于统计分析数据，一般调整总蛋白浓度至 1-3mg/ml。某些组织样本，如肝脏，肾脏，胰腺因含有较高浓度的内源性过氧物酶, 在样品浓度较高的情况下会和试剂盒底物反应出现假阳性。
注 意 事 项：
若为皮肤组织，离心后，需去除上层脂肪，以及下层沉淀，取中间层样本用于检测。

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