怎么预防细胞污染？

一、前言

经常做实验的小伙伴都知道，从事细胞培养工作时都有可能面临细胞受到污染的境况。对于细胞的受污染问题，最为紧要的在于防范，因为一旦细胞受到污染，欲挽回已十分艰难，即便成功挽回，细胞的状态亦会受损，进而对实验结果造成影响。因此，让我们首先探讨一下如何有效地进行预防。

生物安全柜是细胞处理的主要场所，而培养箱是细胞生长的主要场所，所以细胞污染通常就发生在这两个地方。那么在使用生物安全柜和培养箱时如何做好预防措施呢？

二、措施

1. 所有进入安全柜的东西都要尽可能保证无菌

如果实验室条件允许，那直接购买商品化的试剂和耗材是最稳妥的，他们的试剂和耗材一般只要是正品都可以保证无菌。如果试剂需要自己用干粉配制，那么在配制中需要严格按无菌操作进行。另外每次试剂配制量不宜过多，比如wan全培养基建议以一到两周内用完为宜。

试剂在分装时可以考虑再用针头式过滤器过滤一次，减少污染的可能性。如果所用移液器吸头是散装的，则注意在将吸头装入吸头盒时需要带手套，因为灭菌时无法完quan去除吸头上可能粘附的油脂和其他杂质。

2. 安全柜每次使用前需要紫外照射30min灭菌

安全柜需再通风5min以上保证换气到位。每次处理细胞前应将实验需要的各种试剂、耗材备齐，尽量减少细胞处理过程中的来回走动。安全柜内的东西尽量摆放有序，具体可以根据个人使用习惯而定，如果你使用的是公用安全柜，则可能需要使用前临时调整。

实验过程中所有试剂不用时需要盖上瓶盖，瓶盖打开时除了干净的吸头，其他任何东西都不要从瓶口的上方经过。如果使用培养皿培养细胞，则处理时不要长时间打开皿盖。如果所用吸头没有滤芯，那在使用时注意不要将试剂倒吸入移液器，如果倒吸的是培养基，极易成为细菌生长的温床。一把有菌的移液器可以轻松污染所有使用其处理过的细胞，所以一旦发生倒吸，要及时用酒精棉球擦去倒吸的试剂，有条件的建议使用带滤芯的吸头。

3. 使用培养皿培养细胞，放入培养箱前摇匀时要轻柔

不要将培养基摇到皿盖和皿身的间隙中，这样在细胞生长时很容易污染。如果使用瓶盖没有气孔的细胞瓶培养细胞，放入培养箱前需要将瓶盖拧松半圈左右，保证瓶内外可以进行气体交换，注意不要拧太松，这样在细胞生长时也很容易污染，有条件的建议选择瓶盖有气孔的细胞瓶，这样放入培养箱前直接拧紧瓶盖即可。由于培养箱内的温度和湿度很高，所以最好定期用75%酒精擦拭培养箱消毒。培养箱里水槽中的水需要使用无菌水，不可以用自来水。

三、那么细胞如果还是不幸污染了又该怎么办呢？

把细胞污染分为早期污染和晚期污染两种情况。早期污染是细胞状态变差，但依旧能保持生长，显微镜下未见明显微生物或可见少量微生物。这种情况的话我们在换液时可以多用PBS洗几次，然后加入适合的抗生素。早期污染只要发现及时，处理得当，救回来的可能性还是很大的。

晚期污染则是细胞形态发生明显改变，细胞停止生长，显微镜下可见大量微生物。这时候建议大家及时清理掉相关细胞，以免污染其他细胞。在对安全柜和培养箱进行消毒后，再重新复苏早批次的细胞。

细心的会发现，新细胞收到后，不应急于开展实验，而应该先小心培养，冻存一到两个批次的细胞后再开展实验，这样实验过程中如果细胞出现问题，可以有冻存细胞保证实验还能继续进行。

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