常见的膜蛋白提取方法

　　细胞膜是一种特殊生物膜，不仅保证了细胞内各种生理反应有序进行，也实现了物质、能量和信号的正常传导，其大部分功能依靠细胞膜上的膜蛋白完成。膜蛋白提取的难点较多，主要原因是膜蛋白在生物体内的表达水平较低，具有强的疏水特性，并且通常在实验条件下难以维持正确构象。下面让我们一起来看看常见的膜蛋白提取方法都有什么吧！

　　一、先分离膜，然后提取

　　如选用冷热交替法、反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶法和酶处理法使得细胞破碎，然后通过剃度离心得到含有膜蛋白的粗组分。

　　（例如：michael11液氮研磨组织→加入匀浆缓冲液及蛋白酶抑制剂→差速离心→蔗糖密度梯度离心→收集37%与41%间的成分，即为质膜部分→裂解即可收集膜蛋白）。

　　二、用特殊的去污剂选择性的分离

　　采用去垢剂将疏水蛋白从其膜结构中溶解下来，然后将蛋白质稳定。去垢剂的选择通常是依据对所需要蛋白质的提取效率来确定，但在某些情况下，还要考虑到以后的纯化步骤。虽然许多膜蛋白必须在去垢剂存在的情况下进行纯化，但最终仍可能需要除去去垢剂。在设计膜蛋白溶解方案时，必须考虑某一去垢剂的特殊性质。如tritonX-100在280nm处有吸收，如果某蛋白质的测试与280 nm处的吸收有关，就应避免使用这类去垢剂。将膜制剂与胞质蛋白及细胞核分离后，再进一步从细胞膜制剂中将所需的膜蛋白增溶下来。这种做法的好处是可以用强烈的去垢剂提取细胞骨架的相关蛋白，而无需考虑胞质蛋白、细胞核成分或染色质成分的混入。使用这种方法所获得的膜蛋白，无论在种类上还是数量上，都比酸溶解法所得到的蛋白（＜5000 Da）要多。

　　一般提取的膜蛋白量往往只占膜蛋白总量的不足0.1%，所以充分的膜蛋白的提取，无疑对于研究膜蛋白的结构和功能都是非常重要的。第二种方法简单，可靠，但有时含有其他蛋白。一般的都是利用4度时所有的蛋白质原则上都溶于TritonX-114水溶液，在温度超过20度时，此溶液分为水相和去污相；此时亲水性蛋白溶于水相，疏水的膜蛋白溶于去污剂相中。利用此性质可提取膜蛋白。

　　三、膜蛋白色谱（CMP）

　　CMP+分离强疏水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如SDS）溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（P-端），又具有阳离子钙（C-端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、SDS结合量有关。利用原子散射法研究cAMP的分离机制发现，样品与SDS结合后在离子交换柱上存在SDS分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换，从而达到分级分离的目的。

　　四、离心柱法提取膜蛋白

　　高渗的蛋白裂解液让细胞溶涨破裂后，超高速离心。

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