流式细胞术的样品制备方法

　　流式细胞术的测定对象是单细胞或单个微粒，在FCM技术中能够制备出合格的单细胞悬液是非常重要的环节，单细胞悬液来自于动植物的不同组织器官，也可来自于非生物样品，FCM中大多数为生物样品，生物样品主要来源于培养细胞、血液、新鲜实体组织以及石蜡包埋组织等，不同的组织有不同的单细胞分散方法，因此建立切实可行的FCM单细胞悬液的具体制备方法，在流式细胞分析中至关重要。那么你知道流式细胞术的样品制备方法都有什么吗？让我们一起来看看吧！
 

　　一、酶消化法
 

　　酶的作用原理主要有三方面：一是破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等，二是水解组织细胞的紧密连接结构的蛋白质，三是水解组织间的粘多糖物质。酶消化法是实体组织分散为单细胞的主要方法之一。
 

　　二、机械法
 

　　机械法分散实体组织包括:用剪刀剪碎组织或用锋利的解剖刀剁碎组织，用匀浆器匀浆，用细注射针头反复抽吸细胞等，最后用300目尼龙网过滤细胞得到单细胞悬液。
 

　　三、化学处理法
 

　　化学处理法的主要原理是:将组织细胞间起粘连作用的钙、镁离子置换出来，从而使细胞分散下来。
 

　　四、注意事项：
 

　　1. 需要注意的是酶学方法的使用条件和影响因素(如酶浓度、酶效价、作用时间、pH值)等，例如胃蛋白酶在碱性环境下失去活性、胰酶在中性溶液中活性欠佳。
 

　　2. 采用网搓法同样也可获得大量细胞，但机械法容易造成细胞碎片和细胞团快，因此常与其他方法配合使用。
 

　　3. 新鲜组织标本应及时处理保存，避免细胞自溶导致DNA降解。
 

　　4. 根据实验目的选择最佳固定方式;如采用酶学法需注意酶的溶剂、消化时间、pH值、浓度等，同时根据组织成分合理选用酶类，例如含大量结缔组织肿瘤，如食管癌、乳腺癌、皮肤癌等应选择胶原酶。
 

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