Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒的常见问题有什么？如何解决？

Elabscience自主研发的Caspase 1活性检测试剂盒采用分光光度法，可用于检测细胞、组织裂解液或其它样本的caspase 1 活性。那么你知道Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒的常见问题有什么吗？该如何解决呢？让我们一起来看看吧！

一、OD405 值偏低或无信号

1. 焦亡现象不明显或者细胞处于焦亡晚期，细胞破碎死亡。解决方法：焦亡现象不明显以及诱导过度至细胞死亡均无法有效检测到 caspase 1的活化，可设置梯度诱导浓度和诱导时间选择最佳的诱导方案。

2. 细胞诱导时的密度太大。解决方法：降低诱导时细胞的密度，摸索最佳诱导密度，推荐诱导浓密为5~10×105 /mL。

3. 细胞数目太少，Cell Lysis Buffer太多。解决方法：增加细胞的数量，每100万细胞加入50~100 µL Cell Lysis Buffer。

4. 检测总蛋白量较低。解决方法：使用Bradford 法测浓度，提高蛋白检测的总量，可以进行预实验检测，检测总蛋白不低于50ug。

5. 温度较高，Cell Lysis Buffer中的DTT失活，Caspase 酶失活。解决方法：Cell Lysis Buffer 和细胞裂解过程在冰上进行，每 10 分钟进行涡旋混匀一次，充分保证酶活。

6. 细胞沉淀的保存条件不佳，导致细胞降解，Caspase酶失活。解决方法：收集细胞沉淀后立即放入-20℃（1个月）或者-80℃（2个月）保存备用，规定时间内进行检测。

7. 37℃孵育时间过长。解决方法：适当延长 37℃孵育时间，建议最佳孵育时间为1~2小时内，随着时间延长，control 组的背景数值会逐渐增大，导致结果偏低。

二、OD405值偏高

1. 细胞处理试剂或者药物有颜色，且在405nm 波长有吸收峰。解决方法：增加细胞离心洗涤的次数，设置细胞处理试剂的空白对照，最终实验结果减去药物试剂的影响。

2. 检测样本中有较多气泡。解决方法：排除气泡后再检测。

3. 使用回收的96孔板中有杂质附着，导致结果偏高。解决方法：建议使用新的一次性 96 孔板。

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