Coriell人类基因组DNA标准品(NA12878)定量方法

一、DNA是如何提取的？

在2019年之前，使用Qiagen Autopure LS仪器或通过改良的Miller盐析法手动从新鲜血液、唾液、永生化淋巴细胞和成纤维细胞中纯化基因组DNA。自2019年1月1日起，gDNA的分离使用自动磁珠纯化法(Hamilton Microlab STAR利用Promega的ReliaPrep大容量HT分离系统)或手动使用改良的Miller's盐析程序。

二、DNA质量控制是如何进行的？

DNA浓度通过A260处的分光光度吸光度测定，使用1O.D.相当于50 ug/ml双链DNA的惯例或Oubit dsDNA BR测定法，一种基于染料的荧光方法，取决于存储库。为了评估DNA完整性，使用Agilent TapeStation评估DNA。TapeStation软件确定DNA完整性数字（DIN）作为gDNA完整性的度量。

用6个常染色体微卫星标记的多重PCR方法验证了DNA样品的一致性。在同一反应中，用一对额外设计的引物扩增X染色体和Y染色体釉原蛋白基因之间的等位基因差异区域来确定性别。

三、DNA样本的浓度和体积是多少？

Coriell运送的大多数样本在300-375 ng/ul之间，但不同的存储库是不同的。每个DNA样品的浓度可在随货件一起提供的浓度表上找到。请注意，对于不同的存储库，浓度是由不同的方法确定的。

四、应该如何重新测试DNA浓度？

我们建议使用Nanodrop或传统的基于cuvelte的分光光度计，TE作为合适的样品空白。DNA浓度可以根据A260值使用1.0 D.相当于50ug/ml双链DNA的惯例来计算。

Qubit@dsDNA BR测定（Q32850:ThermoFisher Scientific）也可用于测定DNA浓度。该测定使用超灵敏荧光核酸染色，用标准荧光计和荧光素激发和发射波长定量溶液中的双链DNA（dsDNA）。

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