RNA提取成功的要点有哪些？

RNA是目前发现细胞内生物功能zui丰富多样的生物大分子，同时是DNA与蛋白质信息传递的桥梁，因此完整RNA的提取和纯化是功能基因组时代的重要手段。那么你知道RNA提取成功的要点有哪些吗？让我们一起来看看吧！

1. 组织样本要尽可能的新鲜，避免反复冻融。

2. 提取时组织要充分研磨，组织量不宜过少，更不宜过多。

3. 加入裂解液后应给予充分的孵育时间，使样本充分裂解。

4. 在用Trizol法提取时，分层后吸取上清的原则是“宁愿少吸，不能多吸"，千万不能提取到中间层，否则会导致严重的基因组DNA污染。

5. 洗涤时洗涤液应充分浸润到管壁的四周，确保洗涤che底。

6. 柱式提取法，洗涤完后除了对柱子进行空离后，还应当将吸附柱置于超净台内吹风5~10 min，使有机溶剂充分挥发干。

7. 柱式法最后洗脱时候，当加入DEPC水后还应孵育3~5 min，或者提前将DEPC水加热至60℃，可提高洗脱得率。传统的Trizol裂解异丙醇沉淀法最后RNA是用DEPC水溶解沉淀，则应当给予适当溶解时间，并用枪头不断吹吸离心管底部。

8. 预防RNase污染，应注意以下几个方面：

（1）经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。

（2）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

（3）RNA在Trizol试剂中不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150 ℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水che底清洗，再灭菌，即可去除RNase

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