RNA提取的原理是什么？

不同组织RNA提取原理是将细胞裂解，释放出 RNA，并通过不同方式去除蛋白，DNA 等杂质，最终获得高纯度 RNA 产物的过程。常用的RNA提取方法是Trizol方法，Trizol内含异硫氰酸胍能迅速破碎细胞，同时使核蛋白复合体中的蛋白变性并释放出核酸，由于释放出的DNA和RNA在特定pH值下的溶解度不同，且分别位于中间相和水相，从而使DNA和RNA得到分离，取出水相后，通过有机溶剂 (氯仿) 抽提及异丙醇沉淀，可得到纯净RNA。那么你知道RNA提取的原理是什么吗？让我们一起来看看吧！

一、常见RNA提取样本细胞裂解方法

1.异硫氰酸胍/苯酚（Trizol）

原理：苯酚裂解细胞，变性蛋白，但不能wan全抑制RNase活性。异硫氰酸胍迅速溶解蛋白，破碎细胞，解离核蛋白复合体，释放核酸，并抑制RNase活性，保持RNA完整性。苯酚是酸性酚，后续加入氯仿进行有机萃取。

特点：得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在内的总RNA。但产生有机试剂废物。

适用范围：次级代谢较少的植物组织，如幼苗、幼叶等。培养细胞、动物组织、微生物。

2.胍盐/β-巯基乙醇法：

原理：胍盐一般是盐酸胍或异硫氰酸胍。盐酸胍迅速裂解细胞，变性蛋白，并抑制核酸酶活性。配合β-巯基乙醇还原蛋白质结构中的二硫键，从而使RNase变性。

特点：得率高

适用范围：次级代谢较少的植物组织，如幼苗、幼叶等。培养细胞、动物组织、微生物。

二、常见抽提方法：

1.酚氯仿抽提（有机试剂抽提）

原理：将被裂解的生物样本，混匀离心分相以后，RNA在上层水相，DNA，蛋白质在中间层，下层有机相。收集水相加入乙醇或异丙醇可沉淀RNA，漂洗后得到RNA。

优点：得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在内的总RNA。

缺点：用到苯酚、氯仿等有毒试剂。

2.硅胶柱法抽提

原理：硅基质材料在一定的高盐缓冲系统下高效、专一地吸附核酸。（高盐低pH吸附核酸，低盐高pH释放核酸。

优点：操作简单、安全无毒

缺点：需配合高速离心机使用；提取的总RNA不含小于200nt的小RNA。

3. 磁珠法抽提

原理：纳米微球磁珠材料表面涂上一层二氧化硅，使磁珠获得吸附能力。

优点：磁场中快速分离，无需离心，可实现自动化操作。

缺点：成本较高；提取的RNA可能残存磁珠。

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