pei转染试剂如何配置

　　pei转染试剂广泛应用于多种细胞系包括293、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 Hela 细胞等。pei转染试剂如何配置呢？

　　一、pei转染试剂配置前准备：

　　(1)通过胰酶消化收集细胞，用适当的完q培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90％）。

　　(2)根据细胞贴壁情况于含5％CO2的37℃温箱中孵育8-24h，当细胞贴壁完q后即可开始转染。

　　(3)转染前换入2mL预热的无血清培养基。

　　二、配置PEI-DNA混合物

　　以60mm组织培养皿用420μL反应总体积为例。准备两支1.5mL离心管，一管将质粒DNA（总量2-8μg为佳）加入240μLHBS中，混匀。另一管中则用HBS将100μM的PEI储存液稀释成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混匀后于室温静置20-30min。

　　三、pei转染试剂配置后细胞孵育

　　将420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀，置于含5％～7％CO2的37℃温箱孵育。

　　注：每次用100μM的核酸PEI转染试剂储存液前都需要先将其充分混匀，保证所取的浓度一致。

　　四、pei转染试剂配置后细胞培养

　　培养6-10h后更换为37℃预热的含有血清的培养基，继续培养，16h左右可以观测到报告基因的表达。