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技术文章
更新时间：2022-10-11
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美国cellscript试剂盒包括用于体外转录的试剂盒以及使用帽类似物或加帽酶的5' RNA加帽的试剂盒。
l mRNA为什么要加帽：
1、防止5'末端被降解。
2、在细胞中，帮助成熟mRNA穿过核膜，进入胞质。
3、增强翻译。
4、帮助后续可变剪接的过程。
l 加帽类型：
1、Cap 0型（m7G5ppp5Np）：仅所加的鸟嘌呤核苷酸被甲基化，存在于单细胞。
2、Cap I型（m7G5ppp5NmpNp）：转录本第一个核苷酸的2'-O位也被甲基化，普遍存在于所有细胞。
3、Cap II型（m7G5ppp5NmpNmpNp）：转录本第一和第二位的2'-O位都甲基化，存在于10％-15％细胞中。
l 体外加帽的必要条件：
1、在基因组全长克隆时，必须在正向引物5'末端添加T7强启动子序列。
2、以T7启动子作为体外转录启动子。
3、在正向引物5'末端加一个“盖帽G"，有利于提高体外转录得到的RNA分子的侵染活性。
产品名称 | 货号 | 规格 | 简介 |
T7 mScript™ Standard mRNA Production System | C-MSC11610 | 10次 | 用于体外mRNA的转录过程， 将高产量转录与转录后加帽和加尾的优点集于一身。 |
C-MSC100625 | 25次 | ||
T7-FlashScribe™ Transcription Kit | C-ASF3507 | 50次 | 用于使用T7 RNA聚合酶和经典(GAUC) NTP生产体外转录的RNA。 |
T7-Scribe™ Standard RNA IVT Kit | C-AS3107 | 50次 | |
SP6-Scribe™ Standard RNA IVT Kit | C-AS3106 | 50次 | 用于使用 SP6 RNA 聚合酶和经典 (GAUC) NTP 生产体外转录的 RNA。 |
ScriptCap™ m7G Capping System | C-SCCE0625 | 25次 | 用于使用 ScriptCap Capping Enzyme、GTP 和SAM对体外转录的RNA进行转录后加帽。可进行cap0和cap1加帽。 |
ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase Kit | C-SCMT0625 | 25次 | 用于将含有Cap 0帽的RNA转化为 含有Cap I帽的 RNA。 |
ScriptCap™ Cap 1 Capping System | C-SCCS1710 | 10次 | 用于使用ScriptCap 加帽酶、ScriptCap 2'-O-甲基转移酶、GTP和SAM对体外转录的RNA进行转录后加帽。Cap 0和Cap I可分别加帽。 |
l 美国cellscript试剂盒(C-SCCS1710)原理：
ScriptCap™ Cap 1 Capping System可提供ScriptCap Capping Enzyme和ScriptCap 2'-O-Methyltransferase两种酶进行盖帽过程。其中，ScriptCap Capping Enzyme可在体外通过三种酶促反应催化一个cap nucleotide（帽核苷酸）连接到具有5'-三磷酸基团的初始RNA的5'末端 ，从而形成Cap 0，其表现形式是：m7G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3') 。(m7G代表N7-甲基鸟苷帽核苷，ppp三磷酸链接帽苷碳端和RNA氮端，N1(pN)x-OH(3') 代表初始转录后RNA）。
ScriptCap 2'-O-Methyltransferase可介导Cap 0到Cap I的盖帽过程，其可从供体SAM（S-腺苷甲硫氨酸）中转移一个甲基到Cap 0的2'位置，从而形成Cap I。
l 美国cellscript试剂盒(C-SCCS1710)特点：
1. ScriptCap™ Cap 1 Capping System提供ScriptCap Capping Enzyme和ScriptCap 2'-O-Methyltransferase（2'氧甲基转移酶），可在RNA的5'末端产生Cap 0或Cap I帽结构，也可单独获得Cap 0或Cap I。
2. 反应后的Cap RNA可直接进行Poly(A)聚合反应，无需再次进行处理，可方便进行后续的翻译过程。
3. ScriptCap Cap I Capping System改进了共转录加帽方法，使其加帽效率可以接近100%，所有加帽RNA均能够大量且正确产生，最终可以以合理的成本获得大量且正确的加帽RNA 。
l 美国cellscript试剂盒(C-SCCS1710)应用：
该产品多用于用于动物体外RNA转录合成过程，以进行5'末端的Cap 0或Cap 1结构的产生，提高体外RNA的稳定性和翻译效率。
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