siRNA转染

1. siRNA导入细胞的方法

siRNA导入细胞的方法有化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术等。技术的选择要考虑转入时细胞的承受能力、细胞对病毒感染的敏感性、细胞生长特性等实验条件的限制。对于贴壁细胞来讲化学转染技术比较合适，而对于悬浮细胞，电穿孔更有效。

2. 转染试剂的选择

在选择转染试剂时，首先考虑的是特定的细胞株，而不是被导入细胞中的物质。在试剂的选择上建议选择线性PEI转染试剂。

3. 筛选转染试剂

好的转染试剂有以下特点：如下表

4. 细胞在转染过程中死亡的处理方法

如果细胞在转染后大多数死亡，那就说明转染条件不适合细胞生存，需要进行进一步的优化。在优化转染条件时需要考虑的因素：转染试剂（线性PEI转染试剂）和细胞特异性条件。例如：siRNA与转染试剂的比例、转染时间、细胞传代数和细胞密度等。

5. 提高难以转染的细胞转染效率的方法以及转染效率的确定

如何提高难转染细胞的转染效率是目前研究的一个技术难题。一般推荐使用电转移法，该方法对细胞的损伤比较大，所以这种方法不太合适。荧光标记siRNA是荧光显微镜、共聚焦显微镜和流式细胞术常用的检测转染效率的方法。

6. 转染后细胞死亡的原因及转染条件的优化

选择像线性PEI转染试剂这种毒性小的转染试剂也可以达到优化转染条件的目的。另外，如果siRNA靶向的基因对维持细胞生长非常重要，那么细胞死亡的现象可能是由基因干扰。如果检测受到细胞死亡的影响，可以适当调整检测时间。