先让我们来说说
百奥创新分离试剂盒！该试剂盒用于悬浮或贴壁培养的细胞系。它能快速有效的将培养的细胞分成三个不同的组分（细胞质、细胞膜/细胞器、细胞核/细胞骨架）进而确定蛋白质的亚细胞定位。细胞组分分离对于研究许多蛋白质的定位、观察蛋白质的迁移和确定蛋白-蛋白络合物（如细胞支架有关的蛋白）有重要意义。
试剂盒中CIB缓冲液分离细胞质的蛋白，MIB缓冲液分离完整的膜和细胞器的蛋白，CyNIB缓冲液分离细胞核和细胞骨架的蛋白。试剂盒包含足够的缓冲液，能进行20次测定。
那么，分离到的各组分在用于SDS-PAGE和WB分析其他指标之前，可先测定组分分离效率。这就用到了我们的百奥创新检测试剂盒Cell Fractionation Antibody Sampler Kit #11843。其中#8727 MEK1/2(D1A5) Rabbit mAb用于检测细胞质的蛋白（Cyto），#5318AIF(D3902)XP® Rabbit mAb用于检测完整的膜和细胞器的蛋白（Mem），#4499Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb和#5741 Vimentin(D21H3) XP®Rabbit mAb可分别用于检测细胞核和细胞骨架的蛋白（Nuc）。
全细胞裂解物（WCL）代表总蛋白质。该图显示细胞质的蛋白（Cyto），完整的膜和细胞器的蛋白（Mem）和细胞核和细胞骨架的蛋白（Nuc）分离干净且效率高。
zui后，百奥创新小编给大家总结了实验中的注意事项：
1.除了添加和超声 CyNIB buffer 外，其他所有步骤都需要在冰上或 4℃ 操作。
2.该试剂盒可用于贴壁或悬浮的细胞。
3..1X 蛋白酶抑制剂 (#5871) (每500μl buffer 中加入5μl 100x 的蛋白酶抑制剂，试剂盒包含) 和 1 mM 新鲜的 PMSF (#8553) (每500μl buffer 中加入2.5 μl 200 mM 的 PMSF, 试剂盒不包含) 需现配现用。
4.Buffer中已含磷酸酶抑制剂，无需额外添加。
5.步骤D和E中所给体系，是根据10cm 培养皿中90%融合度的HeLa细胞（——5x106个细胞）得来的。
6.如果 CyNIB buffer 溶解后有絮状物，请在37℃水浴中孵育*溶解。
7.注意：保存各组分时需十分小心不要吸到沉淀，以免污染。
8.所有裂解液短期保存（1月内）需放 -20°C，长期保存（1月以上）则需放-80°C 。
北京友谊中联生物科技有限公司是CST的一级代理商，更多详情请咨询我们（/4）。
更新时间：2018-03-27
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